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高速逆流色譜是連續(xù)液-液分配色譜

2010-12-23

高速逆流色譜
高速逆流色譜是連續(xù)液-液分配色譜，其固定相通過(guò)重力場(chǎng)和離心力作用保留在分離柱內(nèi)，而流動(dòng)相按液-液分配色譜的原理將要分離、制備的組分一一帶出色譜柱外檢測(cè)并收集。高速逆流色譜避免了固定相對(duì)被分離組分理化性質(zhì)的影響，也避免了不可逆吸附。
利用高速逆流色譜可從粗制品中一步制備獲得高純度單體，適合用于工業(yè)上大規(guī)模制備。也可廣泛用于生化工程、醫(yī)藥、天然產(chǎn)物、環(huán)境分析、食品等到領(lǐng)域中的微量分析。
聚四氟乙烯管纏繞在支架上形成多層螺旋管做分離管，共有三個(gè)分離管串聯(lián)在一起，分離管由自轉(zhuǎn)軸控制轉(zhuǎn)速，而三個(gè)分離管又共同安裝在帶有公轉(zhuǎn)軸的主機(jī)上。主機(jī)公轉(zhuǎn)軸的轉(zhuǎn)速可與自轉(zhuǎn)軸的轉(zhuǎn)速相同或不同。調(diào)節(jié)公轉(zhuǎn)軸的轉(zhuǎn)速和自轉(zhuǎn)軸的轉(zhuǎn)速使分離柱內(nèi)固定相和流動(dòng)相達(dá)到平衡后，就可進(jìn)樣到色譜系統(tǒng)中分離。
高速逆流色譜分離原理：在B點(diǎn)主機(jī)公轉(zhuǎn)的離心力與3根分離管自轉(zhuǎn)的離心力方向相反，流動(dòng)相與固定相混合在一起，固定相和流動(dòng)按分配原理分配樣品中的組分。
高速逆流色譜旋轉(zhuǎn)時(shí)影響固定相在分離管中的保留率，保留率越高分離效果越好。
             固定相占分離管的總?cè)莘e-排出的固定相體積
      保留率=────────────────────
                  固定相占分離管的總?cè)莘e
進(jìn)入分離管流動(dòng)相流動(dòng)的方向可與主機(jī)轉(zhuǎn)動(dòng)的方向相同或相反。兩者的方向相同，或者主機(jī)反方向轉(zhuǎn)動(dòng)，而流動(dòng)相正方向流動(dòng)，固定相保留率高，分辨率也高。同時(shí)，固定相的保留率與主機(jī)轉(zhuǎn)速和流動(dòng)相的流速也有很大的關(guān)系。
高速逆流色譜對(duì)混合樣品中組分的有交分離依賴于樣品各組分分配系數(shù)的差異。影響組分分配的因素很多，也包括洗脫液體第的組成、pH值、離子強(qiáng)度等。在蛋白質(zhì)的分離中，pH值的影響大。
應(yīng)用pH9.2的聚乙二醇2000-磷酸鹽體系分離細(xì)胞互C、血紅蛋白和溶菌酶。3種蛋白質(zhì)按照其分配系數(shù)的大小按順序流出。細(xì)胞互C和溶菌酶的Rs達(dá)到1.5,而血紅蛋白分配系數(shù)大，基本上完全分配在固定相中，難以被洗脫。在前兩咱蛋白質(zhì)被完全洗脫后，以固定相反向流動(dòng)洗脫血紅蛋白。顯示出因反相流動(dòng)洗脫會(huì)帶出部分流動(dòng)相，色譜基線線波動(dòng)較大。

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